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梅毒螺旋体RPR和TPPA检测方法对比评价
马梅香
武进中医医院检验科 江苏省常州市 213161
【摘 要】目的：通过研究梅毒 RPR 和 TPPA 实验来对比梅毒螺旋体的检测方法.方法：选择本院门诊疑似感染梅毒的患者 54 例,同时进行 RPR 和 TPPA 血清学检测,对其检验结果进行对比分析.结果：梅毒螺旋体血清学检测,RPR 和TPPA 结果有所差异,但差异不具有统计学意义（P>0.05）.TPPA 单阳性者考虑为晚期梅毒或既往感染,RPR 单阳性者考虑假阳性或处于感染初期,在做进一步筛查后可确诊或排除.结论：RPR 适用于梅毒初筛,阳性者不排除其他流行性疾病的可能,需在 TPPA 定性检测后确诊.但 TPPA 检测可能因病人感染疾病的复杂性而导致检测不出,故而需要 RPR 检查相互配合.
【关键词】梅毒螺旋体；RPR；TPPA；检测
梅毒是全世界流行的性传播疾病,是由梅毒螺旋体感染导致.梅毒患者是其唯一转染源, 一经感染便会快速播散至全身,主要传播方式为血液传播和传播,侵犯到人体神经系统、心血管系统等多个重要器官,且无典型临床症状表现,极易造成临床误诊的情况.近年来梅毒在我国的传播速度明显增加,不仅影响感染者的正常生活,在晚期梅毒也会严重威胁患者生命.虽然传播的形势严峻,但梅毒是一种可于临床治愈的疾病,为了做好梅毒的诊断和防治工作[1] ,尽早的检出和治疗是十分必要的.TPPA 检测主要针对梅毒螺旋体产生的特异性抗体即抗梅毒螺旋体抗体,RPR检测主要是针对具有抗体性的反应素.作者分析了临床常用的检测梅毒的两种方法,旨在寻找快捷方便、灵敏度高、特异性好的临床常规检测梅毒螺旋体感染的途径.
1 资料与方法
1.1 基础资料
2017 年 9 月至 2018 年 8 月期间在本院性病门诊和皮肤病门诊选取 54 例疑似梅毒病例作为研究对象, 患者年龄23～40岁,男女比例 31：23.所有病人在接受检查前均对本次研究知情同意.
1.2 仪器与试剂
本次研究采用 TECAN RMP200 型全自动酶免分析系统、KJ-210BD 震荡器、离心机、酶标仪（MK3）等仪器,试剂采用RPR试剂盒 （上海荣盛生物技术有限公司） ,ELISA 试剂盒（上海荣盛科技有限公司）,TPPA试剂盒 （日本富士瑞必欧株式会社） .以上试剂均在有效期内使用.ELISA 法严格按照说明书在 TECAN RMP200 型全自动酶免分析系统编制运行程序进行检测,所有检测操作程序以及检测结果判断均严格按照试剂盒仪器说明书实施.
1.3 研究方法
对54例病人抽取空腹晨血3mL, 于4℃冰箱保存待检,样本检测需在 4h 内完成.分离血浆,留取血液上清,对患者血清样本进行检测.RPR 法：RPR 全称为快速血浆反应素环状卡片试验,在 23-29℃环境状态下,吸取 50 微升梅毒阳性和 50 微升梅毒阴性对照均匀辅加在纸卡的两个圆圈中,另外,再取 50 微升待检血同样辅加在纸卡的另一圆圈中,使用专用针头,滴管吸取分离后的血浆滴 1 滴到检测卡上,使用RPR 旋转仪水平旋转卡片,8min,100 转 /min,之后在光线充足处观察卡片颜色判断结果,若卡片圆圈中有黑色凝聚颗粒和絮状物,则表示该样本为阳性反应,若无凝聚块,记为阴性.TPPA 法：全称为梅毒螺旋体明胶颗粒凝集试验,试剂盒中含有超声裂解后的梅毒螺旋体抗原菌体,将其包被与人工明胶载体上,可于样本中的梅毒抗体产生较明显的凝集反应,形成肉眼可见的红色凝集物,检测时,将分离后的血浆样本按照 TPPA 试剂盒操作,若出现颗粒凝集在孔底称大环形或多边形且边缘粗糙,可定性为梅毒阳性,颗粒聚集于孔底, 且边缘光滑, 可判定为梅毒阴性.该方法用于梅毒特异性抗体检测具有较高的特异性和敏感性等优势,在梅毒确认实验中是国内外所公认的.但是操作复杂,无法自动化判定结果,不能用于大规模标本的筛查.
1.4 指标观察
对比 RPR 检测和 TPPA 检测的阳性结果,并根据两种检测结果阳性进行分组.
1.5 统计学分析
实验数据采用 SPSS19.0 进行分析,阳性比用百分数（%）表示,行卡方检验对比分析.P<0.05 表示差异显著具有统计学意义.
2 结果
2.1 54 例受检测者的两种方法检测结果对比
RPR 检测判定为阳性者有 54 例,经检测为炎性的有 51 例,阳性率为 94.44%（51/54）；TPPA 检测判定阳性 49 例,经检测为炎性的有 49 例,阳性率为 90.74%（49/54）；卡方检验分析两种检测方法的差异,P>0.05 不具有统计学意义,说明两种检测方法在梅毒阳性检出率上不存在统计学差异.详见表 1.
2.2 根据两种方法检测结果分组分析
两种方法检测出的血清样本阳性有一定的差别,RPR、TPPA 均为阳性的 46 例,单一阳性的有 8 例,分组如表 2 所示.
3 讨论
梅毒由苍白梅毒螺旋体感染引起,是一种慢性系统性传染病,梅毒感染后可于全身各个组织器官扩散,早期主要攻击皮肤、黏膜等组织,晚期可蔓延至心血管系统、骨、神经系统,可导致主动脉炎、主动脉瘤、脊髓梅毒等严重疾病[2] ,患病特点时隐时显,病程较长.目前梅毒的实验室诊断方法主要包括病原学和血清学方法,其中病原学检查的可靠性较强,但极易受其它因素影响制约,相对来说,更适用于科研或教学.血清学检查具体可分为非梅毒螺旋体抗体和梅毒螺旋体抗体两种实验方法. 非梅毒螺旋体抗体实验简单易操作,试剂成本低,通过肉眼即可判定,可快速做出有效诊断,多用于早期筛查和临床疗效观察,但由于此方法具有非特异性,所以有一定的假阳性率；而特异性梅毒螺旋体抗体实验存在较高的特异性,且较为敏感,因此该方法往往不在疗效观察、判定复发以及是否再感染中使用,主要用于梅毒确诊实验.
本文研究结果表明,RPR 梅毒阳性检出率为 94.44%,TPPA 梅毒阳性检出率为 90.74%,RPR 和 TPPA 两 种 检 测 方 法在梅毒阳性检出率上不存在统计学差异（P>0.05）.RPR 和 TPPA 检测出的血清样本阳性存在一定差异,RPR、TPPA 均为阳性的 46 例,单一阳性的有 8 例.从检测结果对比中可以发现,RPR 和 TPPA 两种检测方法结果不完全相同,两种方法的检测原理亦不相同,RPR 试验是一种非特异性梅毒血清学检测方法.用于检测病人血清中有无心磷脂抗原, 梅毒螺旋体感染后,破坏人体细胞会释放出抗原性心磷脂,可使机体做出免疫应答反应产生抗体,但此方法不具有特异性[3] .TPPA 试验直接利用梅毒螺旋体的特异性抗原 - 抗体反应检测血清样本中的 IgM 或 IgG 抗体,具有较高的灵敏度.心磷脂释放产生反应素的前提是机体受到梅毒菌攻击,一般在梅毒感染后的 5 ～ 8 周产生,在正规治疗治愈后或梅毒晚期消失[4] ,故而,RPR 法不适用于早期和晚期梅毒的检测,而梅毒螺旋体抗体在感染后即可出现免疫反应,且持续性长,伴于患者感染后的全部时期,因此,TPPA 检查可用于对梅毒螺旋体感染的定性试验.在检测中,因 RPR 检测的非特异性,常常会有假阳性的出现,患者可能是非梅毒感染者,因同样出现抗类脂反应素而导致检测结果阳性,需要 TPPA 检查做进一步确诊检查, 若TPPA提示阳性, 则可确诊,并尽快接受正规治疗,然而,梅毒感染的患者其带有 CD4 信息的细胞明显增加,导致患者很容易感染其他疾病（如 HIV 等）,复杂型疾病感染的患者在 TPPA 试验时可能出现难以解释的结果,故在检测中若出现 TPPA 阴性而 RPR 阳性时,需考虑其他疾病的筛查.
综上所述,梅毒诊断的检测过程是复杂的,诊断结果往往会受到一些不确定因素的影响.因此在梅毒诊断检测实践过程中,应同时联合使用多种实验方法进行检测,并相互校正,方能有效提高梅毒阳性检出率,有效减少和避免漏检或误诊的情况发生[5] ,进而促使梅毒患者尽早得到有效诊治,提升梅毒患者临床治愈率.
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