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猪血清对猪肺炎支原体培养影响
郑铁鑫 张影 柴华 尹尧 付丽杰/ 哈药集团生物疫苗有限公司
一、材料
(一)菌株
1. 猪肺炎支原体P-5722-3 株,由美国硕腾动物保健公司提供,哈药集团生物疫苗有限公司保藏.
2. 猪肺炎支原体P-5722-3 株CCU 阳性标准品（CCU 检测）,由美国硕腾动物保健公司提供,哈药集团生物疫苗有限公司保藏.
(二)完全培养基
1. 培养基组分A ：根据猪肺炎支原体P-5722-3 株培养基配方要求,制备组分A.
2. 培养基组分B ：猪血清
3. 猪肺炎支原体P-5722-3 株完全培养基由培养基组分A 与培养基组分B 共同制备,培养基组分A 由哈药集团生物疫苗有限公司采用无菌过滤方式制备,培养基组分B 采用热灭活方式制备.
(三)无菌检验培养基
酪胨琼脂斜面(G.A)、硫乙醇酸盐酪胨汤(T.G) 葡萄糖蛋白胨(G.P),均由本公司培养基班组提供.
(四)设备
恒温振荡器: 上海世平实验设备有限公司SPH-211C
PH 计: METTER TOLEDO FE 20C
二、方法
(一)试验方法
针对培养组分B,分别选择5 种猪血清,进口猪血清1#( 美国产)、进口猪血清2#（新西兰产）、国产猪血清3#、国产猪血清4#、国产猪血清5#,各2 个批次,按培养基总量10% 与培养基组分A 制备成猪肺炎支原体完全培养基,进行平行培养试验,猪血清在使用前均采用56℃,30 min 热灭活处理.
(二)培养方法
取猪肺炎支原体P-5722-3 株菌株按10% 接种完全培养基中,37℃振荡培养,每隔8 h 检测一次PH 值,当PH 值接近6.8 时,将检测时间缩短,直至PH 值到达6.8左右时,取少量样品进行检测并传代培养,连续传代培养三代并分别进行无菌检验.
(三)菌液浓度测定方法
采用CCU 法（颜色变化单位测定法）,该方法是以微生物在培养基中的代谢活力为指标,来计算微生物的相对含量,取51 支无菌培养管,每一管装1.8 ml 猪肺炎支原体完全培养基( 含有酚红) ；在第一管加入0.2 ml待测猪肺炎支原体菌液,充分混匀,从中吸取0.2 ml 加入到第二管,以此类推,10 倍梯度稀释,直到最后一管,做好标记,进行五组；采用同样的方法对CCU 阳性标准品进行稀释,最为阳性对照,取未接种的一管作为阴性对照,置于37℃振荡培养14 ～ 16 d,根据颜色变化情况计算CCU 含量.
三、结果
1. 进行3 次5 组平行试验,试验结果见表1、表2、表3.
（备注：猪肺炎支原体P-5722-3 株CCU 阳性标准品检测区间值在0.2×108 ccu50/ml ～ 1×108 ccu50/ml）2. 五种猪血清摇瓶试验结果.
1. 三组平行试验数据无较大性偏差,数据可信,可作为参考性依据.
2. 通过分别选择2 各批次血清进行对照试验,降低批次间血清差异影响因素.
3. 通过表1、表2、表3 可以看出,猪肺炎支原体P-5722-3 株使用进口1# 猪血清制备的完全培养基培养效果最好.
四、小结与讨论
1. 美国产进口1# 猪血清与新西兰产进口2# 猪血清批间差异较小,在培养上表现均较好,尤其是美国产进口1# 猪血清最为突出.
2. 国产4# 猪血清较国产3# 猪血清与国产5# 猪血清要好,但其批间差异较大.
3. 猪肺炎支原体P-5722-3 株菌株不管在进口血清还是在国产血清中,连续三代培养呈现培养结果（CCU）上升趋势.
4. 通过三组平行试验,验证了猪血清作为培养组分B 在培养过程中的重要性,选择出最为适合猪肺炎支原体P-5722-3 株菌株生长的猪血清.
肺炎论文范文结:
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