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大豆水溶性蛋白检测
陈义飞1,徐佳璐2
（1．黑龙江省大庆市粮食质量检验监测站,黑龙江大庆163001;2．哈尔滨国家粮食质量监测中心,黑龙江哈尔滨150060）
摘 要：大豆是主要的饲用粮品种,水溶性蛋白是重要的检测指标.现通过比较试验研究了凯氏定氮法测定大豆水溶性蛋白,提取过程中温度、时间等因素对实验最终结果的影响,找出了最佳的实验条件和方法,为大豆水溶性蛋白检测方法的选择提供了依据.
关键词：大豆；水溶性蛋白；检测；研究
中图分类号：S816. 42
文献标识码：A
文章编号：2095-9737(2016)07-0070-01
收稿日期：2016-02-06
作者简介：陈义飞（1972 -）,男,黑龙江大庆人,大专,工程师,主要从事粮食质量检验监测方面工作.
1 仪器与材料
主要仪器设备：KDY - 9820凯氏定氮仪；perten3100锤式旋风磨、JA - 203N千分之一电子天平；可调速离心机、HY4调速多用振荡器等.样品与试剂：选取黑龙江地产大豆,除去杂质作为样品.试剂有20g/L硼酸溶液；40g／L氢氧化钠溶液；0. 1Omol／L盐酸；浓硫酸（分析纯）.
2 实验方法
将除杂后的大豆样品用锤式旋风磨进行粉碎后通过60目筛,通过率90%以上.每次实验用千分天平准确称取5g样品,加入一定量蒸馏水进行溶解,在一定温度条件下震荡提取一段时间,萃取完成后将溶液转移至容量瓶中并定容至250mL,用凯氏定氮仪测定其蛋白质含量即为样品的水溶性蛋白含量,分别记录消耗滴定液的体积,计算检验结果.
提取温度对水溶性蛋白测定结果的影响实验.用分析天平分别准确称取5. OOOg样品5份,编号为A1～A5.分别置于250mL具塞磨口三角瓶中,分别向其中加入蒸馏水各200mL,充分摇匀充分分散后,分别将其置于温度设定为20℃（室温）、30℃、40℃、50℃、60℃的恒温水浴锅中,分别进行提取2h.提取完成后经过离心,转移至容量瓶中定容,最后进行消化并测定其蛋白含量.
提取时间对水溶性蛋白测定结果的影响实验.用分析天平分别准确称取5．OOOg样品5份,编号为Bl～B5.分别置于250mL具塞磨口三角瓶中,分别向其中加入蒸馏水各200mL,充分摇匀（注意勿使样品过多的粘于瓶壁上）充分分散后,将其置于温度设定为40℃的恒温水浴锅中,分别进行提取30 min、60min、90min、120min和180 min.提取完成后分别经过离心,转移至容量瓶中定容,最后进行消化并测定其蛋白含量.分别记录消耗滴定液的体积,计算检验结果.
提取次数对水溶性蛋白测定结果的影响实验.用分析天平分别准确称取5．OOOg样品5份,编号为C1～C5.分别置于250mL具塞磨口三角瓶中.对Cl进行一次提取,向Cl中加入蒸馏水200mL,充分摇匀后,将其置于温度设定为40℃的恒温水浴锅中进行提取2h.对C2进行2次提取,向C2中加入蒸馏水lOOmL,充分摇匀后,将其置于温度设定为40℃的恒温水浴锅中进行提取th之后,离心转移出溶液,向剩余样品中继续加入蒸馏水100mL,重复上述操作.用同样的方法分别对C3～C5进行3～5次的提取,提取用蒸馏水的总量均为200mL,总提取时间均为2h,每次提取后都进行离心.将5份样品都提取完毕后,定容、消化并测定其蛋白含量.分别记录消耗滴定液的体积,计算检验结果.
3 结果与分析
提取温度对水溶性蛋白测定结果的影响：通过计算得到各样品测得值如下：A1水溶性蛋白含量为28. 9%,A2水溶性蛋白含量为31.2%,A3水溶性蛋白含量为32. 6%,A4水溶性蛋白含量为32. 5%,A5水溶性蛋白含量为32. 3%.从检测数据可以看出提取温度为20℃、30℃、40℃时,水溶性蛋白含量随温度上升而呈上升趋势,在提取温度为40℃、50℃、60℃时,无明显变化.即水溶性蛋白含量在40℃时达到高峰,温度的提高已经不能提升水溶性蛋白的萃取效果.
提取次数对水溶性蛋白测定结果的影响：通过计算得到各样品测得值如下：B1水溶性蛋白含量为26. 7%,B2水溶性蛋白含量为28. 5%,B3水溶性蛋白含量为31. 8%,B4水溶性蛋白含量为32. 7%,B5水溶性蛋白含量为32. 5%.从检测数据可以看出提取时间为30min、60min、90min时,水溶性蛋白含量随提取时间的延长而呈上升趋势,在提取时间为90 min、120 min和180min时,无明显变化.也就是说,水溶性蛋白含量在提取时间达到90min时达到高峰,提取时间延长已经不能提升水溶性蛋白的萃取效果.
提取时间对水溶性蛋白测定结果的影响：通过计算得到各样品测得值如下：Cl水溶性蛋白含量为32. 4%,C2水溶性蛋白含量为33. 2%,C3水溶性蛋白含量为33. 5%,水溶性蛋白含量为33. 8%,C5水溶性蛋白含量为33.7%.从检测数据可以看出,使用相同水量,相同提取时间,不同提取次数时,提取次数为1次、2次、3次、4次时,水溶性蛋白含量随提取次数的增加而呈上升趋势,且上升的幅度不断减小,在提取次数增加到5次时,无明显变化.也就是说,水溶性蛋白含量在提取4次时达到高峰,提取次数增加已经不能提升水溶性蛋白的萃取效果.
4 结论
通过对实验数据的分析可知,对大豆水溶性蛋白的提取过程中,温度、时间以及提取次数对提取结果均有不同程度的影响.其中,提取的最佳温度为40℃,再提高温度对提取的帮助不大；提取的时间以90 min为宜；提取次数以两次为宜,增加次数提取效果提升微弱,还可能因为多次离心转移操作不当反而降低提取效果.因此,水溶性蛋白的最佳提取条件为：将样品分两次提取之后于40℃下恒温提取90min.
蛋白论文范文结:
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